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生化分析仪酶测试 原因分析

点击次数:3345   发布时间:2016/1/8 15:23:18

  在生化分析测量中,酶的测定比较复杂,要求条件较高,测试比较困难。一般生化分析仪只要酶的测定准确,重复性好,其他项目的测定一般都会没有问题。现就生化分析仪酶分析中常见的测试不准确、重复性差的几点原因进行分析,以供使用者和维修工程师参考。生化分析仪酶的测定一般用动力学法进行测试,其原理是在酶反应的*适条件下,用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反应速度恒定期(零级反应期)来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化,以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小和代谢物的浓度。零级反应期,指反应速度与底物浓度的零次方成正比,也就是与底物浓度无关。在零级反应期期间整个反应过程中,反应物可以匀速地生成某个产物,导致被测溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加,减小或增加的速度(ΔA/min)与被测物的活性或浓度成正比。计算方法有两种。

 1 绝对法
 酶活力(U/L)=ΔA×(反应液体积/样品体积)×(1000/消光系数)。
 2 相对法
 (U/L或mmol/L)=[ΔA(测定)/ΔA(标准)]×标准物的活力或浓度因此,生化分析仪酶的测定与许多条件有关。条件的设置,如:波长(单波长、双波长)、温度、参数、测试方法,延迟和测试时间,吸液量等。另外还与厂家的试剂,样品的采集、保存有关,同时与及时进行质控,从一个样品进入另一个样品测试时及时清洗也有很大关系。例如,GPT的测试一般选择为:波长为340nm,测定时间为20s,延迟时间为40s,吸液量为350μl,温度设定为37℃,试剂空白可任意选择。因此,GPT的测试结果与以下几点有关:(1)340nm为波长低端,能量较低,同时340nm滤光片使用较多,易老化。所以,波长漂移不准,半宽度变化都会影响测量的准确度和重复性。(2)动态法测试有延迟时间、测试时间要求。延迟时间在动态法中为预反应时间,测试时间在动态法中为测试的总时间。零级动力学法是针对特定时间段而言的,酶反应刚启动时反应比较复杂,杂反应较多,必须经过一段延迟时间才能进入稳定反应期,各试剂商对这两段时间有严格规定。所以动态法测试一般温度在37℃,延迟时间不少于15s为好。(3)对于参数的输入应按试剂要求输入其给定值,一般试剂商在试剂盒说明书中给予说明。(4)反应温度。(5)测试空白要准确。(6)吸液量的大小直接影响交叉污染和测量的重复性,建议测试污染性大的物质试剂量应相应增加。一般应>400μl,一般项目为500μl即可。(7)测试不准确、重复性差从操作上看主要有:仪器本身原因如比色杯中有气泡;光源灯老化;光源电压不稳;340nm滤光片性能变差,透射性变小;波长不准确等有关。一般检查液路接口是否松动漏气,更换光源灯泡和340nm滤光片即可解决。至于电路问题,加热元件损坏,温度不受控的问题只能由工程师解决。总之,酶的测定影响准确度的因素很多,只要认真操作,综合分析影响测定的各项因素,认真分析,酶测定的问题不难解决的。根据我们的经验只要试剂、样品准确,保存得当,样品预处理仔细,仪器经常维护、保养,认真操作,问题会自行解决。

原创作者:武汉盛世达医疗设备有限公司

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